gb 1886.355-威尼斯37266

中华人民共和国国家标准

gb 1886.355-2022

食品安全国家标准 食品添加剂 甜菊糖苷

前言

  本标准代替gb 8270-2014《食品安全国家标准 食品添加剂 甜菊糖苷》。

  本标准与gb 8270-2014相比，主要变化如下：

  ——修改了标准范围；

  ——修改了分子式、结构式和相对分子质量等相关内容；

  ——修改了甜菊糖苷含量(以干基计)的指标要求和检验方法；

  ——修改了“灼烧残渣"指标名称为“灰分"；

  ——修改了“总砷(以as计)"指标名称为“砷(as)"；

  ——增加了铅(pb)、砷(as)的检验方法；

  ——将鉴别试验中ph的要求放入理化指标。

1范围

  本标准适用于以甜叶菊(stevia rebaudiana bertoni)叶为原料，经提取、精制而得的食品添加剂甜菊糖苷。已知糖苷包括甜菊苷、瑞鲍迪苷a、瑞鲍迪苷b、瑞鲍迪苷c、瑞鲍迪苷d、瑞鲍迪苷e、瑞鲍迪苷f、瑞鲍迪苷m、瑞鲍迪苷n、瑞鲍迪苷o、杜克苷a、甜茶苷及甜菊双糖苷。

2分子式、结构式和相对分子质量

2.1 13种糖苷的分子式

甜菊苷：c38h60o18

瑞鲍迪苷a：c44h70o23

瑞鲍迪苷b：c38 h60o18

瑞鲍迪苷c：c44h70o22

瑞鲍迪苷d：c50h80o28

瑞鲍迪苷e：c44h70o23

瑞鲍迪苷f：c43h68o22

瑞鲍迪苷m：c56h90o33

瑞鲍迪苷n：c56h90o32

瑞鲍迪苷o：c62h100o37

杜克苷a：c38h60o17

甜茶苷：c32h50o13

甜菊双糖苷：c32h50o13

2.2 13种糖苷的结构式

  13种糖苷的化合物名称、r1位取代基和r2位取代基见表1。甜菊醇(r1=r2=h)为甜菊糖苷配基。

2.3 13种糖苷的相对分子质量

甜菊苷：804.87(按2018年国际相对原子质量)

瑞鲍迪苷a：967.01(按2018年国际相对原子质量)

瑞鲍迪苷b：804.87(按2018年国际相对原子质量)

瑞鲍迪苷c：951.01(按2018年国际相对原子质量)

瑞鲍迪苷d：1 129.15(按2018年国际相对原子质量)

瑞鲍迪苷e：967.01(按2018年国际相对原子质量)

瑞鲍迪苷f：936. 99(按2018年国际相对原子质量)

瑞鲍迪苷m：1 291.29(按2018年国际相对原子质量)

瑞鲍迪苷n：1 275.29(按2018年国际相对原子质量)

瑞鲍迪苷o：1 437.44(按2018年国际相对原子质量)

杜克苷a：788.87(按2018年国际相对原子质量)

甜茶苷：642.73(按2018年国际相对原子质量)

甜菊双糖苷：642.73(按2018年国际相对原子质量)

3技术要求

3.1 感官要求

  感官要求应符合表2的规定。

3.2理化指标

  理化指标应符合表3的规定。

附录a

检验方法

a.1 一般规定

  本标准所用试剂和水在未注明其他要求时，均指分析纯试剂和gb/t 6682规定的三级水。试验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品在未注明其他要求时，均按gb/t 601、gb/t 602、gb/t 603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。

a.2 鉴别试验

a.2.1甜菊糖苷色谱试验

  在甜菊糖苷含量试验中，试样溶液色谱图中13种糖苷的色谱峰应与混合标准品溶液相对应。

a.3 甜菊糖苷含量(以干基计)的测定

a.3.1试剂和材料

a.3.1.1乙腈：色谱纯。

a.3.1.2磷酸二氢钠：色谱纯。

a.3.1.3 磷酸：色谱纯。

a.3.1.4水：gb/t 6682规定的一级水。

a.3.1.5乙腈水溶液：乙腈和水的体积比为30： 70。

a.3.1.6磷酸钠缓冲液(ph 2.6)：称取1.20 g磷酸二氢钠(nah2po4)，溶于800 ml水中，用磷酸调节ph至2.6。

a.3.1.7 瑞鲍迪苷a标准品：瑞鲍迪苷a含量(质量分数，以干基计)≥99.0%。

a.3.1.8瑞鲍迪苷 d标准品：瑞鲍迪苷d含量(质量分数，以干基计)≥95.0%。

a.3.1.9其他11种糖苷标准品：甜菊苷、瑞鲍迪苷b、瑞鲍迪苷c、瑞鲍迪苷e、瑞鲍迪苷f、瑞鲍迪苷m、瑞鲍迪苷n、瑞鲍迪苷o、杜克苷a、甜茶苷和甜菊双糖苷，或使用13种糖苷混合标准品。

a.3.2仪器和设备

  高效液相色谱仪：配备紫外检测器，或其他等效的检测器。

a.3.3 参考色谱条件

a.3.3.1色谱柱：c18反相色谱柱，250 mm×4.6 mm，粒径5 μm；或其他等效的色谱柱。

a.3.3.2流动相梯度洗脱条件(比例可根据实际情况调节)：见表a.1。

a.3.3.3流动相流速：0.8 ml/min。

a.3.3.4 检测波长：210 nm。

a.3.3.5 进样量：2 μl~10 μl。

a.3.3.6柱温：40℃。

a.3.4 分析步骤

a.3.4.1混合标准品溶液的制备

  分别称取适量瑞鲍迪苷a、瑞鲍迪苷d、甜菊苷瑞鲍迪苷b、瑞鲍迪苷c、瑞鲍迪苷e、瑞鲍迪苷f、瑞鲍迪苷m、瑞鲍迪苷n、瑞鲍迪苷o、杜克苷a、甜茶苷和甜菊双糖苷标准品(或13种糖苷混合标准品)，置于同一个容量瓶中，用乙腈水溶液完全溶解后定容，得到混合标准品溶液。混合标准品溶液用于确定13种糖苷的相对保留时间。

a.3.4.2标准溶液的制备

  分别称取5.0 mg、10.0 mg、20.0 mg、25.0 mg的瑞鲍迪苷a标准品和2.5 mg、5.0 mg、10.0 mg、12.5mg的瑞鲍迪苷d标准品，精确至0.1mg，分别置于25ml的容量瓶中，用乙腈水溶液溶解后稀释至刻度，分别得到浓度为200 mg/l、400 mg/l、800 mg/l、1 000 mg/l的瑞鲍迪苷a标准溶液和100 mg/l、200 mg/l、400 mg/l、500 mg/l的瑞鲍迪苷d标准溶液。

a.3.4.3试样溶液的制备

  称取25.0 mg±5.0 mg试样(干基)，精确至0.1 mg，置于50 ml的容量瓶中，用乙腈水溶液溶解后稀释至刻度，得到试样溶液。

a.3.5 测定

a.3.5.1标准曲线的绘制

  在a.3.3参考色谱条件下，分别对200 mg/l、400 mg/l、800 mg/l、1 000 mg/l的瑞鲍迪苷a标准溶液和100 mg/l、200 mg/l、400 mg/l、500 mg/l的瑞鲍迪苷d标准溶液进行色谱分析，记录各浓度标准溶液对应的峰面积值。以标准溶液色谱图中瑞鲍迪苷a或瑞鲍迪苷d的峰面积值为y轴，以对应溶液浓度(mg/l)为x轴，绘制标准曲线，分别得到瑞鲍迪苷a标准曲线和瑞鲍迪苷d标准曲线(强制过原点)，从标准曲线上分别获得瑞鲍迪苷a线性函数斜率(ka)和瑞鲍迪苷d线性函数斜率(kd)。

a.3.5.2含量测定

  在a.3.3参考色谱条件下，分别对混合标准品溶液和试样溶液进行色谱分析。将试样溶液的色谱图与混合标准品溶液的色谱图(见附录b)相比较，以确定试样溶液色谱图中各组分对应的峰。记录试样溶液色谱图中瑞鲍迪苷a、瑞鲍迪苷d、甜菊苷、瑞鲍迪苷b、瑞鲍迪苷c、瑞鲍迪苷e、瑞鲍迪苷f、瑞鲍迪苷m、瑞鲍迪苷n、瑞鲍迪苷o、杜克苷a、甜茶苷和甜菊双糖苷的峰面积。

a.3.6 结果计算

  8种糖苷含量(以干基计)的质量分数w；按式(a.1)计算。

式中：

i——s、a、b、c、f、da、ru、sb，分别对应甜菊苷瑞鲍迪苷a、瑞鲍迪苷b、瑞鲍迪苷c、瑞鲍迪苷f、杜克苷a、甜茶苷、甜菊双糖苷；

fi——i组分与瑞鲍迪苷a的式量比值：1.00(瑞鲍迪苷a)、0.83(甜菊苷)、0.83(瑞鲍迪苷b)、

0.98(瑞鲍迪苷c)、0.97(瑞鲍迪苷f)、0.82(杜克苷a)、0.66(甜茶苷)、0.66(甜菊双糖苷)；

ai——试样溶液色谱图中i组分的峰面积值；

ka—— a.3.5.1 中瑞鲍迪苷a线性函数斜率；

c——试样溶液的浓度，单位为毫克每升(mg/l)。

5种糖苷含量(以干基计)的质量分数ωi按式(a.2)计算。

式中：

i——d、e、m、n、o，分别对应瑞鲍迪苷d、瑞鲍迪苷e、瑞鲍迪苷m、瑞鲍迪苷n、瑞鲍迪苷o；

fi——i组分与瑞鲍迪苷d的式量比值：1.00(瑞鲍迪苷d)、0.86(瑞鲍迪苷e)、1.14(瑞鲍迪苷

m)、1.13(瑞鲍迪苷n)、1.27(瑞鲍迪苷o)；

ai——试样溶液色谱图中i组分的峰面积值；

kd——a.3.5.1 中瑞鲍迪苷d线性函数斜率；

c——试样溶液的浓度，单位为毫克每升(mg/l)。

由式(a.1)和式(a.2)计算得到13种组分的含量ωs、ωa、ωb、ωc、ωf、ωda、ωru、ωsb、ωd、ωe、ωm、ωn和ω0，取各组分含量之和即为试样中甜菊糖苷含量。

a.4 ph的测定

a.4.1仪器和设备

  酸度计。

a.4.2试剂和材料

  称取1 g试样，溶于100 ml除去二氧化碳的水中，用酸度计测定试样溶液的ph。

a.5 甲醇和乙醇的测定

a.5.1试剂和材料

a.5.1.1 甲醇：色谱纯。

a.5.1.2乙醇：色谱纯。

a.5.1.3水：gb/t 6682规定的一级水。

a.5.2仪器和设备

  气相色谱仪：配有氢火焰离子化检测器(fid)和顶空进样器。

a.5.3参考色谱条件

a.5.3.1色谱柱：键合聚乙二醇熔融石英毛细管柱(柱长为30 m，柱内径为0.25 mm，膜厚度为0.25 μm)，或其他等效的色谱柱。

a.5.3.2载气：氮气( 纯度≥99.99%)。

a.5.3.3载气流量：5.0 ml/ min。

a.5.3.4 柱温：40℃保持5 min，以10℃/min升温至120℃，保持2 min，最后以16℃/min升温至

200℃，保持5 min。

a.5.3.5进样口温度：200℃。

a.5.3.6检测器温度：250℃。

a.5.3.7进样体积：1 ml。

a.5.3.8分流比：1 ： 50。

a.5.4参考顶空条件

a.5.4.1顶空瓶温度：80℃。

a.5.4.2顶空瓶平衡时间：30 min。

a.5.5分析步骤

a.5.5.1空白溶液的制备

  移取2 ml水，置于顶空瓶中，迅速压紧瓶盖，备用。

a.5.5.2标准溶液的制备

a.5.5.2.1甲 醇标准溶液的制备

  称取0.1 g甲醇，精确至0.001 g，用水稀释后转移至一个1 000 ml的容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得100 mg/l的甲醇标准储备溶液。将该溶液配制成一系列浓度为2.5 mg/l、5 mg/l、10 mg/l、20 mg/l和50 mg/l的甲醇标准溶液。移取上述系列浓度溶液各2 ml，分别置于顶空瓶中，迅速压紧瓶盖，备用。

a.5.5.2.2乙醇标准 溶液的制备

  称取0.1 g乙醇，精确至0.001 g，用水稀释后转移至一个100 ml的容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得1 000 mg/l的乙醇标准储备溶液。将该溶液配制成一系列浓度为50 mg/l、100 mg/l、200 mg/l、500 mg/l和750 mg/l的乙醇标准溶液。移取上述系列浓度溶液各2 ml，分别置于顶空瓶中，迅速压紧瓶盖，备用。

a.5.5.3试样溶液的制备

  称取1.0g试样，精确至0.001 g，用水溶解后转移至-个10 ml的容量瓶中，在室温下超声处理约3 min，加水稀释至刻度，摇匀。移取该溶液2 ml置于顶空瓶中，迅速压紧瓶盖，备用。

a.5.6 测定

  在参考操作条件a.5.3和a.5.4下，分别对空白溶液、标准系列溶液和试样溶液进行测定，记录甲醇或乙醇的峰面积值。以标准系列溶液色谱图中甲醇或乙醇的峰面积值为y轴，以对应溶剂浓度(mg/l)为x轴，绘制标准曲线，得到甲醇标准曲线或乙醇标准曲线。根据试样溶液色谱图中甲醇或乙醇的峰面积值，从标准曲线求得试样溶液中甲醇或乙醇的浓度(mg/l)。

a.5.7结果计算

  试样中甲醇或乙醇的含量w，单位为毫克每千克(mg/kg) ，按式(a.3)计算。

式中：

c——从标准曲线求得的试样溶液中甲醇或乙醇的浓度，单位为毫克每升(mg/l)；

v——试样溶液的体积，单位为毫升(ml)；

m——试样的质量，单位为克(g)。